一、測試柱效
當您收到一支新的色譜柱的時候,一定按照包裝盒內的出廠檢測報告的操作條件,進行柱效測試!!!TSKgel色譜柱的柱盒內附有出廠檢測報告 (Inspection Data ) 以及使用條件和質量標準 (OCS) 。
▼ 出廠檢測報告(有RI檢測器)
▼ 出廠檢測報告(無RI檢測器)
二、PWXL 系列色譜柱初次使用注意事項
1. 流動相現配現用,配好后使用0.45μm的水相濾膜過了后再超聲脫氣。
2. 樣品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的針式濾頭過濾后再進樣。
3.?G2500PWXL/G3000PWXL的耐受壓力是4.0MPa,G4000PWXL /G5000PWXL/G6000PWXL的耐受壓力是2.0MPa,所以要在儀器上設定限壓保護。
4. 初次拿到柱子后,參照柱盒中的Inspection data的方法評估柱效后再使用。
5. 柱子一定要常溫保存。不能放在冰箱冷藏。
6. 當柱子峰形變寬了或者是壓力升高了,就需要清洗柱子了。
7. 對于使用尿素或者含SDS的流動相的柱子,最好專柱專用,表面活性劑對柱床有不可逆的改性作用。
8. 最好使用保護柱,這樣可以有效延長分析柱的使用壽命。
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三、色譜柱的清洗步驟
?隨著使用時間或進樣次數的增加,出現柱效下降無法達到分離要求,或伴有峰型拖尾、分叉等情況時,就需要清洗色譜柱。建議清洗過程中將色譜柱與檢測器斷開連接,防止流通池污染。此類型色譜柱中的充填介質與樣品間常會發生:(1) 離子相互作用;(2) 疏水相互作用等現象。
吸附的主要原因:
(1)?離子性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂充填介質,由于羧基帶有負電荷(盡管非常少),會與樣品中帶有正電荷的組分發生離子吸附作用。
(2)?疏水性吸附:聚合物基質的SEC色譜柱的充填介質,會與一些疏水性較高的樣品(如:具有苯環的化合物)發生疏水吸附作用。
清洗方法:
1、去除離子性雜質:
對于陽離子性吸附物質,可以通過提高鹽濃度進行過柱清洗。
2、去除疏水性雜質:
對于疏水性吸附物質,可以通過提高有機溶劑的濃度進行過柱清洗。
3、去除難溶性蛋白質:
使用含尿素的溶液清洗。
請根據樣品性質,從方法1和2中選擇適當的清洗方法。如果色譜柱性能仍不能恢復,可考慮采用方法3。但需注意尿素可能會殘留在色譜柱上。
★請注意:應逐漸提高流速,以免損壞色譜柱。
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四、色譜柱的保存
??短期保存(2-3天后還要使用)
如果數天內不會使用色譜柱,請從設備上取下色譜柱。如果溶劑中不含任何腐蝕性的離子,請使用保護塞封住色譜柱的末端。如果溶劑中含有腐蝕性離子,如鹵素,請在保存之前,使用純水清洗色譜柱。
??長期保存(超過3天以上不用)
如果長時間不使用色譜柱,請使用純水替換溶劑。然后請從設備上取下色譜柱,并使用保護塞封住色譜柱的末端。長期保存(例如,超過 3 個月)時,請使用含有0.05 %疊氮化鈉的水溶液保存。?