一、蛋白與多肽

蛋白質(zhì)與多肽具有相同的氨基酸骨架

→ 一般來講，分子量超過10,000的稱為蛋白，小于10,000的稱為多肽。但其實即使這種分類也還是模糊的。

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蛋白質(zhì)因為折疊具有特殊的空間構(gòu)造。

→?酸性或堿性溶液可以破壞這樣的構(gòu)造而使蛋白失活

→ 使用溫和以維持蛋白活性的檢測條件非常必要

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多肽分子尺寸越小，其獲得特殊空間構(gòu)造越困難

→ 比起蛋白分離，多肽分離條件的選擇自由度大（可使用有機(jī)溶劑）

→ 環(huán)狀多肽還是有些特殊立體構(gòu)造的（特殊多肽的個別應(yīng)用）

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多肽是α-氨基酸的α位氨基和羧酸脫水縮合而成的產(chǎn)物

→ 在末端有未反應(yīng)的氨基、羧基存在

→ 所以有N末端、C末端的叫法

→ 在記述氨基酸序列時，N末端在左側(cè)、C末端在右側(cè)（因此，Lys-Arg和Arg-Lys是不同的多肽）

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二、多肽醫(yī)藥品與其他醫(yī)藥品的比較

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* 蛋白與蛋白間的相互作用

** 完整抗體，不含Fab、scFv等

*** 取決于分子量或環(huán)狀多肽Linker的大小

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三、多肽的色譜分離條件

1.?多肽的分離常使用中性--酸性流動相

?2.?堿性條件下，可能會發(fā)生：

Asn/天冬氨酰（有時候Gln/谷氨酰胺也是）脫胺

Asp/天冬氨酸 → isoAsp

S-S交換反應(yīng)

3.?下列色譜分離模式更多使用中性--酸性流動相

反相色譜（RPC）

離子交換色譜（IEC）：尤其是陽離子交換色譜（CIEC）

尺寸排阻色譜（SEC）

正相色譜（NPC?HILIC）

親和色譜（AFC：尤其是金屬螯合親和色譜（IMAC）

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四、TSKgel尺寸排阻色譜柱在多肽分離分析中的應(yīng)用

尺寸排阻色譜（SEC）：利用色譜填料的細(xì)孔徑、基于分析物尺寸大小達(dá)成分離的模式。

※?選擇排阻界限在10000以下的SEC色譜柱

TSKgel UP-SW2000, SuperSW2000, G2000SWXL, TSKgel G2500PWXL, etc.

※?優(yōu)勢

色譜條件單純，利于品質(zhì)管理的使用。

根據(jù)分子量（尺寸）大小可以預(yù)判洗脫位置。

※?缺點

樣品可進(jìn)樣量相對較小。

分析物可能會與固定相（色譜填料）發(fā)生疏水相互作用（→ 添加有機(jī)溶劑）。

※?流動相推薦

流動相：0.1 % TFA＋ 45% 乙腈（0.1 % TFA非必須）。

同種流動相，含有蛋白組分時蛋白的空間構(gòu)造被破壞，分子呈伸展?fàn)顟B(tài)（變性），這時候進(jìn)行分子量表征時，使用100 %水溶液條件下標(biāo)準(zhǔn)蛋白校正曲線不合適。

含0.1 % TFA的流動相分析疏水性高的多肽時，如果洗脫較遲，可以推薦使用醋酸溶液等。

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參考譜圖