抗體藥物的開(kāi)發(fā)是目前全球生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的熱點(diǎn)，在生物制藥領(lǐng)域占有極其重要的地位，被認(rèn)為是目前生物醫(yī)藥研發(fā)的主流方向之一。目前在世界銷售額前10位的生物藥物中，抗體藥物就占了4個(gè)。
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單抗藥物由于具有靶向性強(qiáng)、半衰期長(zhǎng)、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，在治療重大疾病方面受到重視。單克隆抗體是一種生物大分子，由多個(gè)氨基酸組成，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在細(xì)胞培養(yǎng)、純化、儲(chǔ)存過(guò)程中易發(fā)生化學(xué)修飾如糖基化、磷酸化、化學(xué)降解等，所以需要多種方法進(jìn)行檢測(cè)分析。
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高效液相色譜法（HPLC）可以對(duì)抗體藥物以及重組蛋白等蛋白藥物的不均一性進(jìn)行有效的分析。多種色譜分析方法的有效組合，能夠更好地進(jìn)行蛋白藥物的定量和定性分析。例如，分子尺寸排阻色譜法（SEC）可以利用分子尺寸的不同，對(duì)多聚體、片段、PEG化蛋白等樣品進(jìn)行有效的分析；離子交換色譜法（IEC）、疏水作用色譜法（HIC）、反相色譜法（RPC）、正相色譜法（NPC/HILIC）可以對(duì)帶電異構(gòu)體、構(gòu)造異構(gòu)體、糖基化、脫酰胺化及氧化等變化引起的雜質(zhì)進(jìn)行高分辨率、高效分析。分離選擇性取決于色譜分離模式、色譜柱的種類和色譜條件等。
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以下對(duì)抗體藥物異構(gòu)體的HPLC分析，進(jìn)行簡(jiǎn)單的介紹。抗體藥物的高效液相色譜分析的分離模式，主要有以下幾種：
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一、尺寸排阻色譜法（SEC）--根據(jù)分子尺寸的不同，對(duì)多聚體、分解片斷進(jìn)行分析
常用的柱子是TSKgel G3000SWXL。TSKgel SW 型色譜柱屬于硅膠基質(zhì)色譜柱，鍵合了親水性二醇基官能團(tuán)以保護(hù)硅膠表面不與蛋白樣品相互作用。與其他競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品比較，SW型色譜柱單位柱體積的孔隙容量更大，能產(chǎn)生更高的分子量選擇性范圍和更高的分辨率。低吸附作用和均勻的孔徑分布能實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的高效分離。
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